PCR deneylerinde yaygın olarak kullanılan çeşitli enzimler

Polimeraz zincir reaksiyonu, kısaltılmış haliPCRİngilizce'de belirli DNA parçalarını çoğaltmak için kullanılan bir moleküler biyoloji tekniğidir.Çok az miktarda DNA'yı büyük ölçüde artırabilen, vücut dışında özel bir DNA replikasyonu olarak kabul edilebilir.Tüm süre boyuncaPCRReaksiyon sürecinde bir madde sınıfı hayati bir rol oynar: enzimler.

1. Taq DNA'sı

İlk zamanlardaki deneylerdePCR, bilim adamları Escherichia coli DNA polimeraz I'i kullandılar. Ancak bu enzimle ilgili bir sorun var: Her döngü gerçekleştirildiğinde yeni enzimi yenilemesi gerekiyor, bu da operasyon adımlarını biraz karmaşık hale getiriyor ve tam otomatik amplifikasyonu zorlaştırıyor.Bu sorun, bilim adamlarının 1988 yılında Taq DNA polimerazını yanlışlıkla Thermuswaterus'tan izole etmesiyle çözüldü. O zamandan bu yana, DNA'nın otomatik amplifikasyonu bir gerçek haline geldi.Bu enzimin keşfi aynı zamandaPCRteknoloji kullanışlı, pratik ve evrensel bir teknolojidir.Şu anda Taq DNA polimeraz, DNA kitlerinde en yaygın polimerazdır.

2.PfuDNA

Yukarıda bahsedildiği gibi, Taq DNaz'da büyük bir hata vardır; bu nedenle bilim adamları, yanlış eşleşme nedeniyle spesifik olmayan amplifikasyonun hatalı test sonuçlarına yol açmasını önlemek için Taq DNA polimerazı belirli bir dereceye kadar değiştirdiler.Ancak Taq DNA polimerazının modifikasyonu, oda sıcaklığında DNA polimerazın aktivitesini inhibe edebilir.PfuDNA polimeraz, Taq DNA polimerazın yukarıdaki dezavantajlarını iyi bir şekilde telafi edebilir, böylece PCR reaksiyonu normal şekilde gerçekleştirilebilir ve hedef gen amplifikasyonunun başarı oranı etkili bir şekilde geliştirilebilir.

3. Ters Transkriptaz

Ters transkriptaz 1970 yılında keşfedildi. Bu enzim şablon olarak RNA'yı, substrat olarak dNTP'yi kullanır, baz eşleşmesi ilkesini izler ve 5'-3' yönünde RNA şablonuna tamamlayıcı bir DNA tek sarmalını sentezler.Ters transkriptaz öncelikle DNA veya RNA şablonlarından gelen DNA polimeraz aktivitesine bağlıdır ve bu nedenle 3'-5' ekzonükleaz aktivitesine sahip değildir.Bununla birlikte, ters transkriptazın sentez uzunluğunu bir dereceye kadar sınırlayan RNase H aktivitesine sahiptir.Vahşi ters transkriptazın düşük doğruluğu ve termostabilitesi nedeniyle bilim adamları onu da değiştirdiler.

İçinPCRdeneylerde ana sarf malzemeleri şunlardır: bireysel PCR tüpü, 4/8 şeritli PCR tüpü, PCR plakaları.

Labio'nunPCR sarf malzemeleriaşağıdakilere sahip olunavantajlar:

PCR plakaları: Geniş termal döngüleyici uyumluluğu;Yüksek kontrastlı, kolay kuyu tanımlama;iyi floresans yansıması; iyiısı transferi;Sertifikalı DNaz, RNaz, DNA, PCR inhibitörleri ve pirojen içermediği test edilmiştir.

Bireysel PCR tüpleri: Buharlaşmaya dayanıklı; iyiısı transferi;mükemmel optik berraklık; Sertifikalı DNaz, RNaz, DNA, PCR inhibitörleri ve pirojensiz olarak test edilmiştir.

4/8 şeritli PCR tüpleri: Ultra ince duvarlar; yüksek netlik; iyi floresans yansıması;ilaç endüstrisinde, gıda endüstrisinde ve moleküler biyolojide kullanılabilir; yüksek kaliteli, işlenmemiş PP malzeme; Sertifikalı DNaz, RNaz, DNA, PCR inhibitörleri ve pirojen içermediği test edilmiştir.